甲氨蝶呤并非一种具有激素特性的药物，而是一种具有抗癌作用的药物。
甲氨蝶呤表现出广泛的抗肿瘤活性，它能够抑制二氢叶酸还原酶的活性，从而阻止二氢叶酸向有活性的四氢叶酸的转化，因此被广泛应用于抗肿瘤和银屑病化疗，可单独使用或与其化疗药物联合使用。其主要作用机制为直接杀伤癌细胞而不影响正常细胞及组织器官功能。在独立使用时，可用于治疗乳腺癌、妊娠性绒毛膜癌，以及恶性葡萄胎或葡萄胎等疾病的治疗。联合应用时，可以作为一线用药。联合使用其化疗药物，可有效治疗急性白血病、支气管肺癌、头颈部表皮癌、晚期淋巴肉瘤以及晚期蕈样霉菌病等疾病。由于甲氨蝶呤毒副作用较大，因此必须严格掌握用药指征。在大剂量甲氨蝶呤的使用过程中，必须采用亚叶酸进行解救，因为亚叶酸是一种四氢叶酸酯的衍生物，可以在使用甲氨蝶呤的同时，有效地保护正常的组织细胞免受任何损害。另外，亚甲氨嘧啶与环磷酰胺合用也有较好疗效。甲氨蝶呤可用于治疗银屑病等较为严重的病症，但在使用前需要进行活检或由皮肤科医生进行明确诊断。
此外需留意的是，甲氨蝶呤的长期使用可能会导致血细胞数量减少，例如白细胞和血小板的减少，因此需要定期进行复查并进行监测。亦可引发肝肾功能受损，包括黄疸、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶等升高。还可能出现贫血、发热、皮疹、肝脾肿大和关节疼痛等症状。此外，该物质还可能引发多种胃肠道反应，包括但不限于口腔炎、咽喉炎、恶心、呕吐腹痛以及腹泻等症状。所以临床医生在治疗过程中要谨慎选择药物。