支原体的分离培养是诊断支原体感染的可靠的方法，但阳性率较低，费时。临床通过血清抗体检测来诊断，方法为选取双份血清，恢复期抗体滴度上升4倍或下降至原来的1/4。或者支原体-M抗体滴度持续大于1:160。另外应用PCR技术，具有高度的特异性和敏感性，可以发病1-2天可以确诊。与抗体检测同时进行可提高阳性率。