1、酶学检查：糖原贮积病Ⅴ型患者的肌酶升高基本是持续的，日常静息状态下肌酶升高比率约在1000U/L。
2、肌电图：提示肌源性损害，伴有纤颤电位、强直样放电、正锐波等肌肉兴奋性增高表现，发作间期肌电图表现可正常。
3、前臂缺血试验：最常用的筛查糖原贮积病Ⅴ型的运动试验，正常人在运动后1~3分钟，血乳酸先升高后逐渐下降至正常，同时血氨在运动后也升高。但患者运动后血乳酸无明显升高，而血氨升高。如果运动后乳酸升高而血氨不升高，提示氨基酸代谢异常(AMP缺乏)。试验本身可以诱发疼痛、肌红蛋白尿，造成一定的损伤严重者可导致骨筋膜室综合症，应谨慎使用。
4、肌肉活检：显示Ⅰ型纤维萎缩，肌纤维浆膜下多发空泡样改变，可见散在的坏死和再生，再生的肌磷酸化酶组织化学染色也可呈阳性反应，应避免横纹肌溶解或肌球蛋白尿发作后短期内进行此项检查。PAS染色阳性，可被淀粉酶消化，提示糖原颗粒聚集。
5、电镜：电镜下可见膜下、肌原纤维间广泛聚集的形态正常的β糖原颗粒，肌丝间也可有少数聚集卫星细胞中不含有的糖原。
6、生化检查：约76%的患者肌肉中检测不到磷酸化酶活性，24%可残存仅占正常约10%的磷酸化酶活性。大多数病人的肌肉中检测不到酶蛋白。肌肉中聚集的糖原有正常的结构，糖原浓度多轻度增加，大约是正常的2倍，部分病人甚至是正常的。