莱姆病的病因未确定之前，临床诊断主要依靠典型的慢性游走性红斑和流行病学史。但是，对于那些缺乏皮疹而有神经、心脏和关节疾病的患者诊断则较困难。burgdorfer疏螺旋体的发现为本病提供了特异性性诊断论据。但是，从患者液或其他标本检出螺旋体的阳性率极降低，此项检查不能作为临床诊断的常规试验。1982年以来，国外分别以burgdorfer疏螺旋体的全菌蛋白或全菌涂片作为抗原，用酶联免疫吸附试验（ELISA）或音质免疫荧光法（IIF）测定患者血清抗burgdorfer疏螺旋体抗体，阳性率在早期慢性游走性红斑患者得为53—67%，在晚期患者为90—100%。ELISA比IIF更为敏感。测定血清抗Burgdorfer疏螺旋体抗体已成为临床诊断莱姆病的必备试验。抗疏螺旋体的特异性IgM抗体通常在发病后第3——6周达到高峰。特异性IgG抗体水平升高较慢，高峰一般出现在神经和关节病变阶段，并可长期持续。慢性脑膜炎患者脑脊液抗螺旋体水平升高，对诊断莱姆病脑病膜炎有价值。
　　美国疾病控制中心提出诊断莱姆病的标准如下：在流行区，慢性游走性红斑（单个红斑的直径必须至少为5cm，并应由医师检查后确定）或抗burgdorfer疏螺旋体抗体滴度≥1∶256，及1个或1个以上器官系统受累；在非流行区，慢性游走性红斑及抗burgdorfer疏螺旋体抗体滴度≥1∶256，或慢性游走性红斑及1个或1个以上器官系统受累，或抗体滴度≥1∶256及1个或1个以上器官系统受累。符合以上条件的任何1条者可诊断为莱姆病