药敏实验方法主要包括药敏纸片法、牛津杯法和打孔法。其中打孔法易操作，比较适用于商品药物的检测。以下主要介绍打孔法。

一、方法

在“超净台”中（可用经消毒过的箱子等代替），用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环（可自己用铜丝制作，制作的好坏主要看环蘸取培养液后是否能形成水膜）挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。

1、接种：用灭菌接种环（将接种环在火焰上灼烧，放凉）取适量细菌至培养皿周围四点，然后逐点、依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（也可将玻璃棒烧弯做成L型，挑取待试细菌液于培养皿中心，用灭菌L型玻璃棒将待检细菌液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）。

2、打孔：用无菌操作将灭菌的不锈钢小管（一般外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，一般可用玻璃管、瓷管等），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。（市场有售成品，但做之前最好在火焰上过一下，以免来回搬动造成其脱离平皿）

3、加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。（建议提前做好标记，以免将不同药品孔弄混）

4、培养：将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。（单独培养需倒置，避免外界细菌污染；加过药液的不可倒置，以免药液流出）

5、结果判定：按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

抑菌圈直径（毫米）在20以上极敏；15—20高敏；10—14中敏；10以下低敏；0不敏

多黏菌素抑菌圈（较特殊）：在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。